脑膜炎奈瑟菌的实验室检测之旅 [复制链接]

小伙伴们都接种过流脑疫苗，

也都知道流脑是一种可怕的疾病。

但是你知道吗，

确诊流脑颇费周折，

实验室检测脑膜炎奈瑟菌——也就是流脑的病原菌是其中必不可少的环节。

可是，脑膜炎奈瑟菌是怎样在实验室中被一步步检测出并“捉拿归案”的呢？

今天济南市疾控中心带大家长长见识~

脑膜炎奈瑟菌（Neisseriameningitidis）简称为脑膜炎球菌（meningococcus），是流行性脑脊髓膜炎（简称流脑）的病原菌。在显微镜下呈现为肾形或豆形革兰染色阴性双球菌，直径0.6~0.8μm。人工培养后可成卵圆形或球状，排列较不规则，单个、成双或4个相联等。

在孵育24h后的培养物中，常呈现衰退形态，菌体大小较不一致，着色亦深浅不匀。在患者脑脊液中，多位于中性粒细胞内，形态典型。新分离菌株大多有荚膜和菌毛。

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脑膜炎奈瑟菌形态

脑膜炎奈瑟菌培养可使用巧克力平板和血平板。菌落呈现圆形、光滑、湿润、光泽、中央凸起、有完整的边界。培养物灰色，不产生色素，陈旧菌落变成灰色半透明，有时导致底部琼脂变暗。充分分开的菌落可以在18h生长至直径为1mm，几天后变为4mm，有时带波浪形的边界。

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脑膜炎奈瑟菌生物化学特征和鉴定

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Kovac’s氧化酶实验

用铂金接种环、一次性塑料环或木质面签，挑取一部分待测试的菌落，涂抹至制备好的滤纸条上。10s之内呈紫色为阳性反应。这只是脑膜炎奈瑟菌的辅助识别实验，奈瑟菌属的其它细菌以及其他无关的菌种，也可能会出现阳性反应。

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脑膜炎奈瑟菌碳水化合物利用检测

判定一个菌株是否是脑膜炎奈瑟菌，可使用四种糖管（葡萄糖、麦芽糖、半乳糖和蔗糖）测试。脑膜炎奈瑟菌能氧化葡萄糖和麦芽糖，不能氧化半乳糖和蔗糖。

用接种针头从血琼脂平板或巧克力琼脂平板过夜培养物中取少量菌培养物。几次穿刺接种物至培养基上部10mm。接种不同的待测碳水化合物培养基，要使用单独的针头或灼烧针头。虽然反应有时可以在接种24h发生，但是个别菌株确实存在反应延迟现象，因此培养72h之前不能轻易认定为阴性结果。

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脑膜炎奈瑟菌生化鉴定操作程序

细菌的生化反应试验是基于不同细菌对营养物质的分解能力存在差异，其代谢产物有差别，如糖发酵试验、甲基红试验、吲哚试验、氧化酶试验、触酶试验、尿素酶试验、硫化氢试验等。目前常用的商品化生化鉴定试剂很多，以“奈瑟球菌鉴定试剂盒（API-NH）”为例，实验结果如下，结果判定需参照相应的说明书。

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脑膜炎奈瑟菌血清群鉴定

基于荚膜多糖，脑膜炎奈瑟菌可分为12个不同的血清群：A、B、C、H、I、K、L、W、X、Y、Z和29E，其中，A、B、C、W、X及Y是最常见的引起脑膜炎的血清群。

血清分群可使用玻片凝集法，常用的诊断试剂有美国Remel血清、BD脑膜炎奈瑟菌诊断血清等。凝集应该只与一种血清凝集而与生理盐水不发生凝集，从而判定实验菌株为凝集的血清群。此外，尚存在不可分群的脑膜炎奈瑟菌。例如，在生理盐水中凝集的自凝菌；与多种抗血清凝集而无自凝现象；和任何一种抗血清或生理盐水都不能发生凝集的不凝菌。

作者

济南市疾病预防控制中心细菌性疾病检验所

单晓英

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